己烯雌酚（DES）ELISA檢測試劑盒使用說明書 |
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本試劑盒只能用于科學研究，不得用于醫(yī)學診斷 己烯雌酚（DES）ELISA檢測試劑盒 使用說明書 檢測原理 試劑盒采用競爭法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被己烯雌酚（DES）抗原包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的競爭抗原，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的己烯雌酚（DES）呈負相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。 樣品收集、處理及保存方法 1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。 2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。 3. 細胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。 5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 自備物品 1.酶標儀（450nm） 2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3.37℃恒溫箱 操作注意事項 1. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。 2. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。 3. 按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍，最終結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度。 4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。 5. 所有液體組分使用前充分搖勻。 試劑盒組成
注：標準品（S0-S5）濃度依次為：0、0.75、1.5、3、6、12 ng/ml 試劑的準備 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。 洗板方法 1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。 2. 自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。 操作步驟 1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。 2. 設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL； 3. 樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。 4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的競爭抗原50μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。 5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。 6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。 7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。 結(jié)果判斷 1. 15分鐘內(nèi)在波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值； 2. 百分結(jié)合率計算：設(shè)S0管計數(shù)為B0，各標準管或樣品管計數(shù)為B，非特異管計數(shù)為NSB，則百分結(jié)合率計算公式如下：B/B0=(B－NSB)/(B0－NSB)×100% 3. logit計算:各標準點或樣品管的logit值計算公式如下:logit=ln(B/B0)/(1－B/B0) 4. 將標準品的OD均值與標準品0點的OD均相除，為標準點的百分結(jié)合率，在log-logit坐標紙上繪圖。 5. Log-logit雙對數(shù)標準曲線：坐標紙上橫軸從左至右第一個1-9表示為第一個10進位，第二個1-9表示為第二個10進位。第三個1-9表示為第三個10進位。坐標紙縱軸為百分比（1-99），即各標準吸光值的百分結(jié)合率。取一條通過各點的直線。要求盡可能多的點在線上，同時剩余的點均勻分布在直線的兩邊。樣品也同樣由吸光值計算百分結(jié)合率，再從縱軸上的相應(yīng)結(jié)合率找到直線上的點，此點對應(yīng)的橫坐標濃度即為樣品的濃度，無須換算。 6. 人工處理：以標準濃度取log值為橫坐標，對應(yīng)的logit值為縱坐標在普通坐標紙上或以標準濃度為橫坐標，對應(yīng)的B/B0為縱坐標在logit-log坐標紙上畫出標準曲線（理想化時是一條直線）。根據(jù)待測樣 品的B/B0可以從坐標紙上查出樣品的濃度值。如果使用普通坐標紙，查出的數(shù)值應(yīng)取反對數(shù)才是最后的濃度值。 7. 自動處理：使用logit-log或四參數(shù)數(shù)據(jù)處理模式，由電腦自動計算得出結(jié)果。 8. 敏感度：1.0 ng/ml 9. 圖例
試劑盒性能 1. 準確性：標準品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。 2. 靈敏度：最DI檢測濃度小于0.1 ng/ml。 3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。 4. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。 5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。 6. 有效期：6個月 從2011年開始我們致力于在生命科學領(lǐng)域、生物醫(yī)學實驗技術(shù)及論文潤色服務(wù)，協(xié)助客戶各類實驗服務(wù)及論文潤色十多年，是您值得信賴的科研合作伙伴! 如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究，歡迎您與我們聯(lián)系。 實驗技術(shù)服務(wù)： |
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