土壤酸性轉(zhuǎn)化酶 (S-AI) 活性檢測(cè)試劑盒 |
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土壤酸性轉(zhuǎn)化酶 (S-AI) 活性檢測(cè)試劑盒 可見分光光度法 注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。 規(guī)格：50T/24S 產(chǎn)品內(nèi)容： 試劑一：液體 100mL×1 瓶，4℃保存； 試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 25mL 試劑一充分溶解備用；用不完的試劑 4℃保存； 試劑三：液體 20mL×1 瓶，4℃保存。 標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1 支，4℃保存，10mg 無水葡萄糖。臨用前加入 1mL 試劑一溶解,制備 10mg/mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液備用。 產(chǎn)品說明： S-AI 在 pH 為 4.5~5.0 (酸性) 條件下催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖，是土壤微生物蔗 糖代謝關(guān)鍵酶之一。 S-AI 催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖，進(jìn)一步與 3,5－二硝基水楊酸反應(yīng)，生成棕紅色氨基化合物， 在 540nm 有特征光吸收，在一定范圍內(nèi) 540nm 光吸收增加速率與 AI 活性成正比。 試驗(yàn)中所需的儀器和試劑： 可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水、甲苯。 操作步驟： 一、樣品處理： 新鮮土樣自然風(fēng)干或 37℃烘箱風(fēng)干，過 30~50 目篩。 二、測(cè)定步驟及加樣表： 1 、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min ，波長(zhǎng)調(diào)至 540nm ，蒸餾水調(diào)零。 2 、標(biāo)準(zhǔn)液的稀釋：將 10mg/mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液用試劑一稀釋至 4 、3 、2 、1 、0.8 、0.6 mg/mL 的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。 3 、加樣表：
混勻，煮沸 10min 左右 (蓋緊，以防止水分流失) ，流水冷卻后充分混勻，540nm 處蒸餾水調(diào) 零，記錄各管吸光值A ，記為 A 測(cè)定管、A 對(duì)照管、A 標(biāo)準(zhǔn)管、A 空白管。計(jì)算ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照 管，ΔA 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管。 三、S-AI 活性計(jì)算： 1 、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制： 以葡萄糖濃度為 x 軸，相應(yīng)的ΔA 標(biāo)準(zhǔn)為 y 軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程 y=kx+b；將ΔA 帶 入公式得到 x ( mg/mL) 2 、 S-AI 活性計(jì)算 單位定義：37℃每 g 土壤每天產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。 S-AI (U/g) =x×V 酶促÷W÷T V 酶促：酶促反應(yīng)總體積，0.820mL；W：樣本鮮重，g；T：反應(yīng)時(shí)間：1/24d； 注意事項(xiàng)： 1 、如果加入試劑三，煮沸 10min 后有混濁物出現(xiàn)，建議離心除去沉淀 (10000rpm ，2min ) ，取上 清測(cè)定吸光度； 2 、如果吸光值大于 1 ，可以將上清液再進(jìn)行稀釋；若吸光值較小，可以減少上清液稀釋倍數(shù)。兩種 操作均要注意改變公式中的稀釋倍數(shù)。 第 2 頁 共 2 頁 本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請(qǐng)勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測(cè)等用途！ 從2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)外包及論文潤色服務(wù)，協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤色十多年，是您值得信賴的科研合作伙伴! 如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無法完成您的課題研究，歡迎您與我們聯(lián)系。
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