亚洲专区第一页丨天天看天天干丨日日干干丨久久在线精品视频丨丰满人妻av无码一区二区三区丨国产熟妇勾子乱视频丨亚洲a∨国产av综合av网站丨一区二区三区在线不卡丨性一交一乱一伦在线播放丨中文字幕日产无码丨全黄一级男人和女人丨18禁黄网站禁片免费观看女女丨日本真人做爰免费的视频丨成年网站未满十八禁视频天堂丨亚洲国产永久丨亚洲激情黄色丨日韩在线一二三丨日韩免费成人av丨日韩一区二区三区欧美丨黄频在线播放丨性欧美video另类hd尤物丨人妖天堂狠狠ts人妖天堂狠狠丨久久精品中文字幕有码丨午夜福利视频丨好吊操这里只有精品

*酶（CAT）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法

注意：正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

規(guī) 格 ：100T/96S

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體 30mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：液體 125μL×1 瓶，4℃保存。

產(chǎn)品說(shuō)明：

CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是最主要的 H2O2 清除酶，在活性氧清除系統(tǒng)中具有重要作用。

H2O2 在 240nm 下有特征吸收峰，CAT 能夠分解 H2O2，使反應(yīng)溶液 240nm 下的吸光度隨反應(yīng)時(shí)間而下降，根據(jù)吸光度的變化率可計(jì)算出 CAT 活性。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔（UV 板）、研缽、冰和蒸餾水

操作步驟：

一、粗酶液提取：

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備

收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率 20％，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

稱(chēng)取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。二、測(cè)定步驟：

1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 240nm，蒸餾水調(diào)零。

2、CAT 檢測(cè)工作液的配制：用時(shí)在試劑二中加入 25mL 試劑一，充分混勻，作為工作液。

3、測(cè)定前將 CAT 檢測(cè)工作液在 37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）水浴 10min 以上。

4、準(zhǔn)備96孔UV 板一塊（非普通酶標(biāo)板，普通酶標(biāo)板只能透過(guò)可見(jiàn)光，不能透過(guò)紫外光，檢測(cè)波長(zhǎng)小于 340nm務(wù)必使用UV 板）。

5、在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 樣本和 190μL 工作液，立即混勻并計(jì)時(shí)，記錄 240nm

下初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2。計(jì)算ΔA＝A1-A2。三、CAT 活性計(jì)算：

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

1、血清（漿）CAT 活力的計(jì)算:

單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘催化 1nmol H2O2 降解定義為一個(gè)酶活力單位。

CAT(U/mL)= [ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷V 樣÷T=459×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 CAT 活力計(jì)算：

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化 1nmol H2O2 降解定義為一個(gè)酶活力單位。

CAT(U/mg prot)=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V 樣) ÷T=459×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每 g 組織每分鐘催化 1nmol H2O2 降解定義為一個(gè)酶活力單位。

CAT(U/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷（V 樣÷V 樣總×W）÷T=459×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算：

單位的定義：每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化 1nmol H2O2 降解定義為一個(gè)酶活力單位。

CAT(U/104 cell)＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷（V 樣÷V 樣總×500）÷T =0.917×ΔA

V 反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：H2O2 摩爾消光系數(shù)，4.36×104L/ mol /cm；d：比色皿光徑，

1cm；V 樣：加入樣本體積，0.01 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min；W： 樣本鮮重，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500 萬(wàn)；109：?jiǎn)挝粨Q算系數(shù)， 1 mol=109nmol。

b.用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

1、血清（漿）CAT 活力的計(jì)算:

單位的定義：每毫升血清（漿）在反應(yīng)體系中每分鐘催化 1nmol H2O2 降解定義為一個(gè)酶活力單位。

CAT(U/mL)=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷V 樣÷T=764.5×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 CAT 活力計(jì)算：

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化 1nmol H2O2 降解定義為一個(gè)酶活力單位。

CAT(U/mg prot)=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V 樣) ÷T =764.5×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化 1nmol H2O2 降解定義為一個(gè)酶活力單位。

CAT(U/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷（V 樣÷V 樣總×W）÷T=764.5×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算：

單位的定義：每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘催化 1nmol H2O2 降解定義為一個(gè)酶活力單位。

CAT(U/104 cell)=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷（V 樣÷V 樣總×500）÷T=1.529×ΔA

V 反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：H2O2 摩爾消光系數(shù)，4.36×104 L / mol/ cm；d：96 孔板光徑，

0.6cm；V 樣：加入樣本體積，0.01 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min；W： 樣本鮮重，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500 萬(wàn)；109：?jiǎn)挝粨Q算系數(shù)， 1 mol=109nmol。

注意事項(xiàng)：

出現(xiàn)負(fù)值怎么辦？ 首先檢查吸光值是否超過(guò) 3，如果超過(guò)3很可能是沒(méi)有用UV 板，請(qǐng)換用 UV 板。如果未超過(guò) 3，仍然出現(xiàn)負(fù)值則檢查反應(yīng)過(guò)程是否產(chǎn)生氣泡，氣泡多說(shuō)明酶活性太高，氣泡影響 產(chǎn)生了負(fù)值，可以將樣本用提取液稀釋 10 倍后再檢測(cè)。如果稀釋樣本或反應(yīng)體系沒(méi)有產(chǎn)生 氣泡仍然出現(xiàn)較小的負(fù)值，說(shuō)明該樣本測(cè)不到該酶活。

從2011年開(kāi)始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)外包及論文潤(rùn)色服務(wù)，協(xié)助客戶各類(lèi)實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤(rùn)色，是客戶您值得信賴(lài)的科研合作伙伴!

如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無(wú)法完成您的課題研究，歡迎您與我們聯(lián)系。

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)：