技術(shù)支持Article
酶活性檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)原理介紹
點(diǎn)擊次數(shù)：1495 更新時(shí)間：2022-12-21
為了檢測(cè)一種酶的催化活性，有必要首先鑒定從底物(S)到產(chǎn)物(P)轉(zhuǎn)化所包含的化學(xué)變化。迄今為止，在各種關(guān)于酶催化活性文章的相關(guān)論述中，最典型的分類(lèi)方式是按照其所催化的化學(xué)反應(yīng)的類(lèi)型來(lái)進(jìn)行的(如氧化-還原、基團(tuán)轉(zhuǎn)移、消除、異構(gòu)化、重排、縮合、竣化作用等)（FreyandHegeman，2007)。此外，還應(yīng)該考慮是否存在機(jī)制相似的化學(xué)過(guò)程:①涉及小分子底物或大分子蛋白質(zhì)或核酸;②在溶液中易于發(fā)生或需要膜結(jié)合組分才能進(jìn)行;③逆反應(yīng)進(jìn)行到多大的程度。在任何情況下，酶的分析圍繞著以可計(jì)量的方式將給定底物和相關(guān)產(chǎn)物的理化性質(zhì)進(jìn)行區(qū)分的能力來(lái)設(shè)計(jì)。在很大程度上，類(lèi)似的活性檢測(cè)方法已經(jīng)應(yīng)用于這些亞群中的各種酶。在以某種已有檢測(cè)方法為基礎(chǔ)來(lái)為下面兩類(lèi)酶計(jì)檢測(cè)方法時(shí)要慎重，即不同物種來(lái)源的同源酶或催化相關(guān)化學(xué)反應(yīng)的不同的酶。酶活性檢測(cè)的中心主題是確保初始速率的測(cè)定。為了重申這一要點(diǎn)，常見(jiàn)的和較好的做法是,在具有小于等于5%產(chǎn)物轉(zhuǎn)化的時(shí)間內(nèi)測(cè)定反應(yīng)物減少或產(chǎn)物生成的初始速率。這種做法可以給出在初始底物濃度條件下的接近起始反應(yīng)速率的值。
酶的量或濃度可以用摩爾量表示，或者用酶單位的活性表示。
酶活力=每單位時(shí)間轉(zhuǎn)化的底物摩爾數(shù)=速率×反應(yīng)體積。酶活性是存在的活性酶量的量度，取決于的條件。SI單位是katal，1 katal=1 mol/s，更實(shí)際的和常用的值是酶單位（U）=1μmol/min。1 U對(duì)應(yīng)16.67 nanokatals。
酶的比活力是另一種常見(jiàn)的單位，代表酶的純度。用每毫克蛋白質(zhì)所含的酶活力單位數(shù)來(lái)表示。比活力=活力U/mg蛋白。
反應(yīng)的速率是每單位時(shí)間的底物消失（或產(chǎn)物生成）的濃度。
如果已知100％純酶的比活性，那么不純的樣品將具有較低的比活性，從而可以計(jì)算純度。
